尊龙凯时大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养说明书如下:
一、细胞培养条件
细胞名称:大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性:贴壁-悬浮混合生长
冻存条件:无血清冻存液(货号:C7001)
培养体系:F12K + 20% FBS + 1% P/S
传代方法:首次建议进行1:2传代,传代后于2天内更换培养液。
备注:悬浮细胞需离心收集,贴壁细胞按照贴壁细胞的处理方法进行操作,收集培养基留作过渡培养。
二、细胞收到后的处理
当细胞状态良好后,灌满完全培养液并封好瓶口,确保细胞在运输过程中的稳定性。收到细胞后,用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒,然后在超净工作台内执行严格的无菌操作。将细胞瓶放置在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以便细胞稳定。进行显微镜观察,拍照保存不同倍数的细胞生长情况(最佳为40x、100x、200x各一张),前三天的照片为重要售后依据。如果未提供照片,将默认细胞收到状态良好。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
如细胞汇合度未超过80%,将瓶中完全培养液收集至离心管中,保留5ml培养基并放入37℃、5% CO2的孵箱中。"如细胞密度超过80%,可以进行传代培养:
- 贴壁细胞传代:
- 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
- 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞变化,若大部分细胞变圆并脱落,快速进行操作。
- 用5ml以上完全培养基终止消化,轻轻吹打细胞,使其完全脱落,吸出悬液并转移至15ml离心管中,1000 RPM下离心5分钟。
- 弃去上清液并加入1-2ml完全培养基重悬。将细胞悬液按1:2比例分瓶:两个T25瓶,新培养基补充至5-8ml/瓶,放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
- 悬浮细胞传代:
- 方法一:收集细胞,在1000 RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,用1:2的比例分到新瓶中。
- 方法二:半数换液,弃去一半培养基,悬起剩余细胞,按1:2比例分到新瓶中。
b. 细胞冻存
1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时,弃去培养液并用PBS清洗细胞一次;
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml,轻轻观察,待细胞回缩变圆后,加入5ml完全培养基终止消化,轻轻吹打使其完全脱落并转移至15ml离心管,1000 RPM离心5分钟;
3. 弃去上清,沉淀细胞后加入1ml的强力无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中;
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存,如需转入液氮罐,需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐中。
c. 细胞复苏
1. 从液氮中取出冻存管,迅速放入37℃水浴中解冻,待冻存管中无结晶后,用75%酒精擦拭外壁;
2. 将冻存管中细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000 RPM离心5分钟;
3. 弃去上清,沉淀后用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放入37℃、5% CO2的培养箱中培养,第二天更换新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
某些细胞可能在运输过程中脱落,这属于正常现象。如脱落严重,可将所有培养液收集至离心管,进行离心分离,收集上清作后续比对,随后按照上述步骤进行处理。
五、售后条款
1. 细胞出现问题时的补发情况:包括运输途中问题、细胞污染等,需在收到产品48小时内提供真实实验结果,核实后可进行重发;
2. 不予重发情况:如客户操作不当导致细胞状态不良或细胞污染等问题。
以上是尊龙凯时大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的详细培养说明,确保每一步都遵循此指南,可提高细胞培养的成功率。